2014年12月15日，衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)布2015年全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價通知，表示將于2015年度正式開展全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價。

室間質(zhì)量評價也稱為能力驗證實驗（以下簡稱PT），是指多家實驗室分析同一標(biāo)本并由外部獨立機構(gòu)收集、反饋實驗室上報結(jié)果并評價實驗室操作的活動，通過實驗室間的比對判定實驗室的校準(zhǔn)、檢測能力以及監(jiān)控其持續(xù)能力。長期以來，PT一直是臨床實驗室和公共衛(wèi)生實驗室質(zhì)量保證的一個重要組成部分。

室間質(zhì)評目的：提高實驗室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測的質(zhì)量

衛(wèi)生部對全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測展開室間質(zhì)量評價，主要目的是提高實驗室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測的質(zhì)量。通知原文如下：

“新一代高通量測序技術(shù)發(fā)展迅速，并已由實驗室研究進入到臨床檢測應(yīng)用，如外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）檢測、胚胎植入前遺傳學(xué)診斷（PGD和胚胎植入前遺傳學(xué)篩查（PGS）等，其中外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）檢測目前已有國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）批準(zhǔn)的儀器和試劑。為提高實驗室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測的質(zhì)量，衛(wèi)生部臨床檢驗中心于2015年度正式開展全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價。”

2014室間質(zhì)評結(jié)果：絕大多數(shù)結(jié)果符合預(yù)期

這并不是衛(wèi)生部第一次發(fā)布全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價通知，2014年11月，為配合衛(wèi)計委新一代高通量測序技術(shù)應(yīng)用試點工作，衛(wèi)生部臨床檢驗中心開展了該項目的全國室間質(zhì)量評價活動，并要求各臨床實驗室使用日常所用試劑和程序進行檢測。以下是2014室間質(zhì)評主要結(jié)果，數(shù)據(jù)來源于《全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18 和 T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價調(diào)查活動結(jié)果報告 》。

1、樣本情況

本次共發(fā)放 20 個質(zhì)評樣本，編號分別為 1401、1402、1403、1404、1405、1406、1407、1408、1409、1410、1411、1412、1413、1414、1415、1416、1417、1418、1419、1420。樣本為人血漿，樣本量為 700μl。其中 15 份樣本用于本次PT 成績評價，5 份樣本用于正式質(zhì)評發(fā)放樣本類型的參考，不納入本次 PT 成績評價。具體信息見下表。 

2、各檢測平臺使用的實驗室數(shù)及相關(guān)參數(shù) 

本次質(zhì)評涉及多個檢測平臺（由于 CFDA 為檢測儀器和配套試劑共同審批，因此本小結(jié)中所提及的檢測平臺，除 LDT 外，均同時代表該平臺及相應(yīng)的配套試劑）。其中有醫(yī)療器械注冊證的檢測平臺：BGISEQ-100（武漢華大基因生物醫(yī)學(xué)工程有限公司），BGISEQ-1000（武漢華大基因生物醫(yī)學(xué)工程有限公司），DA8600（中山大學(xué)達安基因股份有限公司）等。其他檢測平臺有：NextSeq CN500，BioelectronSeq 4000，NextSeq 500，Ion Proton，Hiseq2000， Hiseq 2500，Ion torrent PGM。需要說明的是，沒有醫(yī)療器械注冊證的試劑和儀器，均屬實驗室自用方法（laboratory developed test，LDT），具體不同平臺的參數(shù)見下表。

3、實驗室回報結(jié)果情況 

共計有 81 家實驗室回報質(zhì)評結(jié)果，4 家實驗室報告了兩個平臺的檢測結(jié)果，共計收到結(jié)果 85 份，其中有效結(jié)果 84 份（即回報結(jié)果完整、在截止日期內(nèi)回報的結(jié)果）。醫(yī)院臨床實驗室共計回報 73 份結(jié)果，獨立實驗室回報 12 份結(jié)果?？傮w來說，本次質(zhì)評絕大多數(shù)實驗室的檢測結(jié)果均符合預(yù)期結(jié)果。在 15 份 PT 評價樣本中，98.8% (83/84)的實驗室與預(yù)期結(jié)果完全相符，只有 1 家實驗室兩份陽性樣本報告了“臨界/灰區(qū)”的結(jié)果，其余結(jié)果也均與預(yù)期結(jié)果相符，具體的總體結(jié)果回報情況見下表。 

4、各檢測平臺不同樣本的符合率情況 

一家使用 Hiseq 2500 的實驗室報告了 1405 和 1413 號樣本（預(yù)期結(jié)果為 T13 陽性）“臨界/灰區(qū)”的結(jié)果。其他平臺所有實驗室檢測結(jié)果均與預(yù)期結(jié)果相符，無假陰性和假陽性結(jié)果。 

5、各檢測平臺對所有樣本檢測的測序原始數(shù)據(jù)量和唯一比對 reads 數(shù)情況

6、PT 成績情況 

PT 成績≥80（即 80 和 100 分）的實驗室發(fā)放質(zhì)評合格證書；PT 成績<80 分的實驗室和未回報完整定性結(jié)果的實驗室發(fā)放質(zhì)評參加證書。本次質(zhì)評中，PT成績?yōu)?100 分的實驗室 83 家，PT 成績在 80~100 分（含 80 分）的實驗室 1 家。1 家實驗室獲得質(zhì)評參加證書。

對開展高通量測序 NIPT 臨床檢測實驗室的啟示

在2014室間質(zhì)評的報告最后，衛(wèi)計委指出：雖然各臨床實驗室的檢測結(jié)果良好，但基于本檢測項目在大多數(shù)實驗室均尚未對臨床開展，因此，在將來正式開展高通量測序 NIPT 臨床檢測中，仍需謹慎對待。 

盡管目前商業(yè)化的平臺（包括 CFDA 批準(zhǔn)或正在進行注冊的平臺）在生物信息學(xué)分析和結(jié)果判讀方面，進行了簡化，但是與以往臨床實驗室開展的核酸檢測項目相比，基于高通量測序的 NIPT 仍然是一個相對復(fù)雜的檢測過程。通常，NIPT 的檢測流程包括：DNA 提取，文庫構(gòu)建，文庫純化，文庫定量，文庫混合、測序以及結(jié)果分析的過程，完成一個批次的檢測至少需要 3~4 天，此外，在文庫構(gòu)建和文庫定量中，會涉及到 PCR 擴增過程。 

因此，如實驗室開展高通量測序 NIPT 的日常檢測，需為臨床基因擴增實驗室，具有一定的核酸檢測的基礎(chǔ)，選擇合適的檢測平臺，并進行性能驗證，具備經(jīng)過嚴(yán)格培訓(xùn)的高素質(zhì)實驗人員，建立實驗室檢測的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，在每批次的檢測中需使用陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控，參加室間質(zhì)量評價。

具體來說，在本次質(zhì)評中，部分實驗室僅有兩個不同的區(qū)域，不符合臨床基因擴增實驗室的設(shè)置要求；在選擇檢測平臺時，醫(yī)院臨床實驗室不建議采用實驗室自用方法 (LDT)，因為LDT 首先需要建立自配試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，然后還需對檢測系統(tǒng)（包括檢測儀器、試劑以及生物信息學(xué)算法）進行性能評價，給出重復(fù)性、分析敏感性、分析特異性、臨床敏感性、臨床特異性、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值等等性能指標(biāo)，而目前來說，對于單個臨床實驗室，要完成 NIPT 的性能評價是非常困難的；實驗室需建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序，并需考慮到開展大量樣本檢測后，出現(xiàn)文庫構(gòu)建失敗、檢測過程操作錯誤、QC 未通過以及“灰區(qū)”樣本需復(fù)檢等情況，以及針對此情況，評價可能對檢測流程和報告時間產(chǎn)生的影響；在當(dāng)前的實驗室環(huán)境條件下，儀器設(shè)備經(jīng)過一定時間的運行后，是否仍能夠保持良好的性能，能否保持原有的 QC未通過率以及檢測失敗率；此外，也不排除技術(shù)快速的發(fā)展，新的檢測平臺的出現(xiàn)，或者在原有檢測平臺上的進一步更新，導(dǎo)至現(xiàn)有的檢測平臺可能面臨更新或淘汰。 

臨床實驗室需明確，基于高通量測序的 NIPT，只是一種篩查試驗，而不是診斷試驗，遺傳咨詢和進一步的檢測非常重要。并且由于檢測原理是基于外周血游離 DNA，因此具有一定的檢測局限性，例如母體嵌合、胎盤嵌合、雙胎、外周血胎兒游離 DNA 比例低等均會對結(jié)果產(chǎn)生影響。

總結(jié)：無創(chuàng)產(chǎn)前檢測離規(guī)范使用又近了一步

不管怎樣，衛(wèi)計委發(fā)布室間質(zhì)評，就已預(yù)示著這項技術(shù)成熟、臨床應(yīng)用急需的檢測離規(guī)范使用又近了一步，而2014年率先通過室間質(zhì)評的技術(shù)平臺，例如上文提到的華大基因、達安基因、貝瑞和康、博奧生物等公司，無疑將在后續(xù)競爭中獲得合作終端和客戶更多的信任。

附：衛(wèi)生部臨床檢驗中心2015年全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價通知